烟草赤星病是由赤星病菌(Alternariaalternata)侵染引起的叶斑类病害，具备潜育期短、时尚速度快的特征，曾数次使世界烟草生产遭受重大损失。20世纪80年代初，在国内各烟叶主产区该病病情呈大幅度上升趋势，紧急影响了烟叶的品质和产量。现在，化学药剂防治仍是控制烟草亦星病的最主要手段。“菌核净”是防治烟草赤星病成效较好的一种内吸性杀菌剂，在黑龙江烟草生产上已有多年的应用历史，但近年来烟草赤星病在东北一些烟区连续发生，该药剂的防治成效明显降低，已成为东北烟叶生产上需要解决的问题。为探讨烟草赤星病菌繁殖代数与其对杀菌剂敏锐性的关系，为合理用药、提升防治成效提供依据，进行了本试验。
1材料与办法
1．1材料
1．1．1供试菌株
2001年从黑龙江宾县烟田NC89品种上采集并经单孢离别、鉴别和纯化的烟草赤星病菌(Alternariaalternata)菌株，在烟草成长前期于7月8、15、24日采集的分别为1号、2号和3号菌株(繁殖代数较小)，在烟草成长后期于7月31日、8月8、16日采集的分别为4号、5号和6号菌株(繁殖代数较大)。
1．1．2供试药剂
40％“菌核净”(Dimethachlon)可湿性粉剂(浙江温州鹿城植保化学厂)；70％“扑海因”(1prodione)可湿性粉剂(法国罗纳—普朗克公司)；70％“代森锰锌”(Mancozeb)可湿性粉剂(西安近代农药有限责任公司)。
1．2办法
1．2．1药剂筛选
将供试2号菌株接种于PDA培养液的平板上，25cC培养1周后，用无菌打孔器制备7—8mm的菌饼，然后把各药剂分别加入PDA中?昆合均匀，制成药齐，j浓度分别为0、5、12．5、25、50、100、200、400和800mg／L的含药剂PDA平板，然后把菌饼分别放在各平板中心，25℃下培养，每隔12h察看1次，至对照培养皿(药剂浓度为0mg／L)内菌丝长满时开始测定并记录各培养皿内菌落直径。试验共设9种处置，每处置3次重复。计算菌丝体的净成长量，并按公式[(对照皿净成长量—处置皿净成长量)／对照皿净成长量)X100％计算相对抑制率，依据各处置相对抑制率的计算结果，计算出各药剂对赤星病菌株的毒力回归方程和抑制中浓度EC值，依据所得结果选出1种对赤星病菌毒力较强(即EC值相对较低)的药剂，作为本试验中测定菌株对药剂敏锐性的供试药剂。
1．2．2供试菌株对药剂敏锐性测定
将1～6号供试菌株分别接种于PDA平板上，25℃下培养1周，然后按1．2．1办法制备菌饼及9种浓度梯度的含药剂平板，接种及处置办法同1．2．1。每菌株设9种处置，每处置3次重复。
1．3数据处置
打造供试药剂与各供试菌株的剂量—特点曲线，通过概率—对数(Probit—log)转换后，求出供试药剂对各菌株的毒力回归方程和EC值。依据EC值比较各菌株对供试药剂的敏锐性。对各菌株的EC值使用离差平方和法计算欧氏距离进行聚类剖析，绘出树状图，比较各菌株对杀菌剂敏锐性的差异。
2结果与剖析
2．1药剂筛选结果
室内测定3种药剂对赤星病菌2号菌株菌丝体成长的抑制用途，并计算药剂对该菌株的毒力回归方程和EC50值，结果见表1。由表1可以看出，“菌核净”、“代森锰锌”和“扑海因”对赤星病菌2号菌株的毒力有不同程度的差异，“菌核净”的EC值最低，说明其对赤星病菌毒力较强，因此选出“菌核净”作为供试药剂。
2．2供试菌株对“菌核净”的敏锐性
依据药剂筛选结果，将“菌核净”作为供试药剂用于测定6个赤星病菌株对其敏锐性，测定结果见表2。
对表2的EC值作聚类剖析，绘出图1。
从表2可以看出，供试的6个赤星病菌株对“菌核净”的敏锐性差异显著，其中4号菌株对“菌核净”最不敏锐，EC值最高，已产生肯定的抗药性，第二为1号菌株；对“菌核净”最敏锐的是2号和3号菌株，EC值较低，表明田间不同时期采集的即繁殖代数不一样的菌株对“菌核净”的敏锐性无肯定规律性，不论前期还是后期采集的菌株都有对“菌核净”敏锐和不敏锐的，从6个菌株EC值聚类剖析树状图(图1)也可以看出这种敏锐性差异状况。
3讨论
(1)通常觉得，一种病原菌的繁殖代数大、再侵染次数多，而且长期在“高的药剂选择重压”环境下，病菌对杀菌剂的敏锐性降低，比较容易产生抗药性。有关研究结果表明，长期连续用内吸性杀菌剂也比较容易使病菌产生抗药性。本试验结果表明，田间不同时期采集的繁殖代数不一样的菌株对“菌核净”敏锐性差异较大，但无肯定规律性，即病菌并没随繁殖代数的增加而减少对该药的敏锐性，无论烟草成长前期采集的菌株还是后期采集的菌株都有对“菌核净”敏锐和不敏锐的，也即烟草赤星病菌繁殖代数与其对“菌核净”的敏锐性没有关性。但大家应注意到对“菌核净”最不敏锐的菌株出目前烟草成长后期，已产生肯定的抗药性，应注意监测。
(2)剖析烟农在防治赤星病时药效减少是什么原因，大家觉得有以下几方面：①喷药时间不合理。烟农总是是在田间烟叶病斑很多出现后开始喷药，而此时病菌已经完成了侵染、潜育和发病等过程，此时喷药只能对病菌第三传播、侵染起到抑制用途，而对已经完成侵染的病菌用途不大；②喷药办法不合理。田间病菌主要从烟叶的背面侵入，而烟农喷洒的药剂总是只喷在烟叶的正面，如此对烟叶背面病菌的杀伤用途不大；③毒力较强菌株的出现。烟草成长后期有毒力较强的菌株(如在本试验中看到的对“菌核净”最不敏锐的4号菌株)出现，可引起病情加重；④菌株对杀菌剂的敏锐性发生变化。因为长期单一地用相同种类杀菌剂，尤其是用途位点单一的内吸性杀菌剂，病菌对杀菌剂的敏锐性减少。
(3)从国内杀菌剂的用情况来看，因为现在杀菌剂类型少，对真菌性病害仍依赖几种常见的杀菌剂进行防治，一旦病菌对一种杀菌剂产生抗药性之后，对用途机理相同的相同种类杀菌剂也具备交互抗性现象，因此抗药性的治理是很必要的。新型杀菌剂的开发和借助是解决抗药性问题的要紧渠道。52％“菌核·锰锌”是一种新型杀菌剂，在室内及田间试验表明对赤星病菌有较强的抑制率，对该病的防治成效也较好。大家觉得在杀菌剂的用过程中，应该做到内吸性杀菌剂与保护性杀菌剂、多位点杀菌剂和特异性杀菌剂轮换用或者混合用，防止用单一用途机理的相同种类杀菌剂，预防病菌产生抗药性。
